A kártevők elleni maradéktalan védelem fontos összetevője a vírusdefiníciós adatbázis és a programösszetevők frissítése, ezért beállításukra és működésükre különösen oda kell figyelni. A főmenü Frissítés ikonjára kattintva a programablak jobb oldalán megjelenik a frissítési ablaktábla. A Vírusdefiníciós adatbázis frissítése hivatkozásra kattintva azonnal ellenőrizheti, hogy van-e újabb verziója az adatbázisnak. A Felhasználónév és jelszó beállításai hivatkozásra kattintva párbeszédpanel jelenik meg, amelyen beírható a vásárlás vagy regisztráció után, e-mailben kapott felhasználónév és jelszó.
Ha már az ESET NOD32 Antivirus telepítésekor beírta felhasználónevét és jelszavát (ez az ajánlott megoldás), a program nem kéri ismételt megadásukat.
Az F5 billentyűvel megjeleníthető további beállítások ablakában egyéb részletes frissítési beállításokat talál. A Frissítési szerver listában válassza az Automatikus kiválasztás listaelemet. Ezen a lapon látható a Beállítások gomb is, amelyre kattintva megadhatja a további frissítési beállításokat, köztük a frissítés módját, a proxyszerver-hozzáférést, a helyi szerveren tárolt frissítések elérését, valamint a másolatok létrehozásának beállításait (az ESET NOD32 Antivirus Business Edition változatban).